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实验室常用缓冲液的优点及缺点,HEPES缓冲液的配制方法--苏州格锐思生物发布于:2021-10-06 浏览:1518 来源:

下面就拿几个比较常见的缓冲液进行详细分析它的优点及缺点:

一、磷酸盐缓冲液的优缺点:

是使用最为广泛的一种缓冲剂,由于它有二级解离,所以缓冲的pH值范围很广,可配置各种pH值的酸性、碱性和中性缓冲液。

A、优点

易配成各种浓度

适用pH范围宽

pH受温度影响小

稀释后pH变化小

B、缺点

易与常见的钙离子、镁离子及重金属离子缔合成沉淀。

二、Tris缓冲液的优缺点:

Tris缓冲液是在生物化学研究中使用较广泛的一种缓冲剂,其本身为弱碱,常用有效pH在“中性”范围。

A、优点

碱性较强,可以只用这一种缓冲液配置由酸到碱的但范围pH缓冲液;

对生物化学过程干扰很小,不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀。

B、缺点

pH受浓度影响较大,稀释10倍,pH变化大于0.1

温度效应大,如4℃时pH=8.4,37℃时pH=7.4

三、HEPES缓冲液的优缺点:

HEPES是一种非离子两性缓冲液,其在pH7.2~7.4范围内具有较好的缓冲能力,常用在生化诊断试剂盒、DNA/RNA提取试剂盒及PCR诊断试剂盒里。

A、优点

在开放式培养或细胞观察时能维持较恒定的pH值,并对细胞无毒性作用。

B、缺点

在高浓度时对一些细胞可能有毒,与其他缓冲剂相比价格略贵。

HEPES缓冲液的配制方法

一、500ml 1 MHEPES, pH = 7.0 Stocksolution的配制

119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸馏水中,加0.5~1M的NaOH水溶液调节至少所需pH(HEPES的有效pH 范围是6.8~8.2),然后用蒸馏水定容至500ml,于4摄氏度保存。

二、加少量盐的HEPESBuffer配方(500ml)

HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O0.198g、用0.5M NaOH 水溶液调节pH值,最后定容。

三、2×HEPES缓冲盐溶液的配制

将1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucanor dextran)和1g HEPES溶解在90ml的蒸馏水,用0.5M NaOH调节至所需pH值,再用蒸馏水定容至100ml即可。

HEPES使用方法有两种:

A、HEPES可按所需的浓度直接加入到配制的培养液中,再过滤除菌。每1000ml培养液中加入2.38克HEPES,待溶后用lNNaOH调pH至7.2,滤过除菌后使用。此时HEPES的使用浓度为10 mmol/L。

B、亦可配成 100 x 贮存液(l mol/L),使用前取99ml培养液加入 lml贮存液,最终应用浓度仍为10mmol/L。l mol/L(100 x)HEPES贮存液配制方法:取23.8g HEPES溶于90ml双蒸水中,用lNNaOH调pH至7.5一8.0,然后用水定容至100ml,过滤除菌,分装小瓶(2ml/瓶),4℃或-20℃保存。

需要注意的是,HEPES缓冲液的使用终浓度为10-50mmol/L,对细胞无毒性作用。一般情况下,浓度为20mmol/L的HEPES即可达到缓冲能力。现在市售HEPES为约10g包装的小瓶,大家根据实际情况正确灵活配制就可以。